電力中央研究所

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電力中央研究所 報告書(電力中央研究所報告)

報告書データベース 詳細情報


報告書番号

U93003

タイトル(和文)

クロレラおよびホウレンソウ細胞のプロトプラスト化と融合に関する基礎的検討

タイトル(英文)

FUNDAMENTAL STUDY ON ISOLATION AND FUSION CONDITIONS OF CHLORELLA AND SPINACH PROTOPLASTS

概要 (図表や脚注は「報告書全文」に掲載しております)

当所で分離した高濃度の二酸化炭素に耐性を有するクロレラ(Chlorellasp.HA-1),および野菜工場における水耕栽培に用いているホウレンソウ(Spinaceaoleraceacv.Lead)の,プロトプラスト化と再生条件,電気的な同種間融合条件について検討した。その結果,(1)クロレラ培養細胞では対数増殖期前期の細胞を2-deoxy-D-glucoseで処理後,ヘミセルラーゼとセルリジンの処理により,またホウレンソウ葉肉細胞ではマンニトールとCa2+の溶液で葉を浸漬処理後,マセロザイムRIOとセルリジンの処理により安定的にプロトプライトを得た。(2)クロレラプロトプラストは,PEGなどを加えたMBMYG培地上に,また,ホウレンソウのプロトプラストはシュークロースなどを加えたK3培地上に,軟寒天溶液と共に重層することにより,細胞を再生・増殖した。(3)クロレラとホウレンソウのプ

概要 (英文)

REPRODUCIBLE PROTOPLASTS WERE OBTAINED BY ENZYMATIC DIGESTION FROM CULTURED CELLS OF CHLORELLA(CHLORELLA SP.STRAIN HA-1)AND MESOPHYLLY CELLS OF SPINACH(SPINACEA OLERACEA CV. LEAD). COMBINATIONS OF CELLUYSIN(5% W/V)AND HEMICELLULASE(5% W/V)WITH 0.8 M MANNITOL AND 8 MM CACL2 FOR CHLORELLA,AND MACEROZYME R10(0.1% W/V)AND CELLULYSIN(1% W/V)WITH 0.4 M SUCROSE FOR SPINACH,WERE MOST EFFECTIVE FOR OBTAINING THE PROTOPLASTS. PREINCUBATION OF CHLORELLA CELLS IN THE LOGARITHMIC PHASE WITH 2DEOXY-D-GLUCOSE FOR 24 HOURS WAS ALSO NECESSARY TO OBTAINA HIGH YIELD OF PROTOPLASTS. COLONY FORMATION BY CHLORELLA PROTOPLASTSWAS CONFIRMED BY THE DOUBLE-LAYERED METHOD WITH REGENERATION MEDIUM(MBM WITH ADDED YEAST EXTRACTS 0.1%,GLUCOSE 0.1%,PEG 14% AND AGAR 1%)AND COAT MEDIUM(SUCROSE 0.6M,AND AGAR 0.6%). REPRODUCTION OF CALLUSES FROM THE SPINACH PROTOPLASTS WAS CONFIRMED BY THE SAME METHOD WITH DIFFERENT REGENERATION MEDIUM(K3 WITH ADDED SUCROSE 0.4M AND AGAR 1%)AND COAT MEDIUM(SUCROSE 0.4M,AND AGAR 0.6%). INTRASPECIES CELL FUSION WAS ALSO STUDIED WITH THE CHLORELLA AND SPINACH PROTOPLASTS. THE OPTIMAL FUSION CONDITIONS FOR EACH PLANT SPECIES WERE AS FOLLOWS: THE CHLORELLA AND SPINACH PROTOPLAST SUSPENSION DENSITY WAS 106 AND 105 CELLS/ML,RESPECTIVELY. THE AC FIELD WAS 100 AND 200 V/CM,RESPECTIVELY. THE DC SQUARE-WAVE PULSE WAS 1750 AND 1600 V/CM,RESPECTIVELY. UNDER OPTIMAL CONDITIONS,THE FUSION EFFICIENCY FOR SPINACH AND CHLORELLA WAS 50% AND 7%,RESPCTIVELY.

報告書年度

1993

発行年月

1993/05/01

報告者

担当氏名所属

吉原 利一

我孫子研究所生物部農業技術研究室

羽生 広道

我孫子研究所生物部農業技術研究室

キーワード

和文英文
プロトプラスト PROTOPLAST
細胞融合 CELL FUSION
クロレラ CHLORELLA
ホウレンソウ SPINACH
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